PatrickM.Brunner,MD,MSc,HelenHe,BS,AnaB.Pavel,PhD,TaliCzarnowicki,MD,MSc,RachelLefferdink,MD,TaylorErickson,BS,TaliaCanter,BS,NehaPuar,MD,StephanieM.Rangel,PhD,KunalMalik,MD,YerielEstrada,BS,JamesG.Krueger,MD,PhD,EmmaGuttman-Yassky,MD,PhD,andAmyS.Paller,MS,MD本期负责人：医院审校：乔建*浙江大医院翻译：医院皮肤性病科全文
背景：尽管越来越多的证据表明患有长期特应性皮炎（atopicdermatitis,AD）的成人患有系统性炎症，但对于近期发病的早期AD儿童的系统性炎症则知之甚少。
目的：分析早期AD儿童的血液炎症蛋白。
方法：使用高通量蛋白质组学（邻位延伸分析）技术，我们对30例患有中重度AD儿童血液中的种炎症和心血管风险蛋白进行了评估，儿童年龄小于5岁（6个月内发病），同时以年龄相匹配的健康儿童人群和患有AD的成人为对照。
结果：在AD儿童血液中，2型辅助T细胞（Thelper,Th）（CCL13，CCL22）和Th17细胞（肽酶抑制剂-3/elafin）标记物增加，同时组织重塑标记物（基质金属蛋白酶3/9/10，尿激酶受体）、内皮细胞激活（E-选择素）、T细胞激活（IL2RA）、中性粒细胞激活（髓过氧化物酶）、脂质代谢（FABP4）和生长因子（FGF21，转化生长因子-a）也一起增加。AD儿童（n=22）的失调蛋白总数要比AD成人（n=61）少。临床严重程度评分与白介素33和36的受体呈正相关，与某些Th1标记物（干扰素γ，CXCL11）呈负相关。
局限性：健康儿童和成人样本中的基线表达水平不同。
结论：在儿童AD发病数月内会出现系统性免疫激活，伴Th2/Th17调节失衡，但蛋白质组学模式与成人AD不同。蛋白质组学模式与疾病进程、合并症发展以及药物反应的未来相关性可能会产生预测性的生物标记物。（JAmAcadDermatol;81：-9.）
关键词：特应性皮炎；婴儿；多重分析；Olink；儿童；外周血；邻位延伸分析。
特应性皮炎（atopicdermatitis,AD）通常与过敏性合并症相关，例如哮喘、鼻结膜炎和食物过敏[1]。成人中越来越多的证据表明，AD也与心血管疾病有关[2-6]，这可能源于数十年的慢性系统性炎症，因为大多数AD病例始于5岁以前。相应地，患有中重度AD成人表现出多种循环炎症介质水平的增加[7,8]，包括心血管风险蛋白，以及活化血液T细胞的频率增加[9]。虽然大多数有关系统性炎症的数据都是基于对患有数十年慢性疾病成人的研究，但早期AD儿童（在疾病发作的最初几个月内）的血液分析有限[10]。在0至17岁的儿童中发现肥胖、高血压和高脂血症的几率增加。儿童AD也与自闭症和注意力缺陷多动障碍（attentiondeficithyperactivitydisorders,ADHD）的增加有关，尤其是那些早期发病或重度AD的患者[11]。ADHD与儿童AD的联系被认为与大脑早期暴露于炎症因子有关[12]。鉴于获取皮肤活检标本困难，寻找血液中合并症风险的生物标志物将是理想的一种方法。
最近在婴儿、幼儿[13,14]和青少年[15]中进行的分析研究表明，早期的AD是T型辅助（Thelper,Th）2型，但也有Th17在皮肤中极化[13,14]。血液研究调查了较少数量的预选标记物[15-40]，并确定了与疾病活动相关的生物标记物，尤其是Th2相关介质（即白介素[Interleukin,IL]-31、CCL17（胸腺-激活调节趋化因子[Thymusandactivationregulatedchemokine,TARC]）、CCL22和CCL27）[32-36]。在整个生命中都观察到记忆T细胞的增加[41-44]，我们最近发现了早期AD儿童血液中Th2细胞的扩增，但没有其他极性T细胞亚群的扩增[29]。总体而言，新生儿显示出较低的CD4+和CD8+干扰素γ（interferongamma,IFN-γ）产生的外周血单核细胞百分比[43]，并且IFN-γ分泌引起的易患特应性进一步降低[18]。相应地，在生命早期增加Th2激活和降低IFN-γ反应频率表明可能增加罹患AD的风险[16,17]。然而，与患有慢性AD[7,8,45]的成人不同，缺乏一种广泛应用的以阵列为基础的蛋白质组学方法来表征早期AD的外周血表型。
内容提要
●患有早发型中重度特应性皮炎的儿童在发病数月内和慢性疾病发展之前已经显示出系统性炎症征象。
●这些数据表明，有必要及早干预儿童特应性皮炎，以预防疾病的慢性化以及特应性合并症（“过敏进行曲”）和其他相关疾病的发展。
方法
患者
研究纳入6个月内发病的中重度AD的30例儿童（≤5岁）（表I）。排除标准为有活动性皮肤感染，在1周内局部外用糖皮质激素/免疫调节剂，在4周内系统使用免疫抑制剂。根据赫尔辛基宣言，在纳入研究之前，父母均签署机构审查委员会批准的书面知情同意书。临床严重程度评分包括SCORAD（SCORingofAtopicDermatitis,SCORAD）、EASI（EczemaAreaandSeverityIndex,EASI）、BSA（Bodysurfacearea,BSA；体表面积以百分比表示）和特应性皮炎瘙痒快速评分（AtopicDermatitisQuickscorepruritusscore）。使用Tewameter（CourageandKhazakaGmbH,Cologne,Germany）对皮损和非皮损部位皮肤进行经表皮水分丢失（Transepidermalwaterloss,TEWL）测量。在4例、2例和0例儿童中分别出现对当前食物过敏、过敏性鼻结膜炎和哮喘的症状。从健康的儿童中获得了19例年龄相匹配的对照样本，这些儿童没有个人或家族过敏史。将蛋白质组学结果与来自58例严重程度相当的成人AD患者以及18例成年对照组的血液数据进行比较，这些均来自已发表的研究（表I）[46]。使用已发表的一组19例AD儿童皮损（年龄≤5岁，发病6个月内）和17例健康儿童对照皮肤样本的转录组学皮肤活检数据（AffymetrixHumanUPlus2.0arrays,Affymetrix,SantaClara,CA）进行血液-皮肤比较[13]。可从以前发表的数据集中获得15例儿童AD患者的转录组全血数据（AffymetrixHumanUPlus2.0arrays）（抽血相同）以进行血细胞-血浆相关性分析[47]。
血液蛋白质定量
收集血液并离心，并将血浆样品保存在-80℃直到进一步处理。等分试样通过蛋白质组学Olink（Uppsala,Sweden）Proseekmultiplexassay（一种使用寡核苷酸标记抗体探针对的领位延伸分析法）平台进行分析[48-50]。该方法通过使用合成DNA链的抗体介导的检测系统以及实时聚合酶链反应平台，从而从10uL血清中定量数百种蛋白质[49]。用Olink炎症I和心血管疾病II和III面板分析样本，其中包含个已确认的和探索性标记[49]。
统计分析
使用R语言（R-project.org）和可通过BioconductorProject（
